Plásmido Doble Nickase (h) Csk: sc-400992-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Csk consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Csk (h) y el plásmido de doble nickasa Csk (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CSK. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Csk Anticuerpo (E-3): sc-166560
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Csk | sc-400992-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Csk | sc-400992-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSK codifica Csk, una tirosina cinasa citosólica que regula negativamente a las quinasas de la familia Src al fosforilar su tirosina inhibitoria C-terminal, limitando así la amplitud de la señalización aguas abajo de receptores inmunitarios, integrinas y receptores de factores de crecimiento. Mediante esta función de control, Csk influye en la adhesión y migración celular, la remodelación del citoesqueleto y la transducción de señales proximal al receptor en vías como la señalización del receptor de células T y la señalización de adhesión focal. Una actividad o regulación alteradas de CSK pueden perturbar redes de fosforilación que determinan los umbrales de activación de las células inmunitarias y los programas de señalización proliferativa. La desregulación del control de quinasas de la familia Src vinculada a CSK se ha asociado con contextos de señalización inmunomediada y oncogénica, lo que respalda su estudio en modelos mecanísticos de homeostasis de la señalización.
Csk El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CSK en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CSK. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CSK. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CSK alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.