Csk Plasmide Double Nickase (h): sc-400992-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Csk Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Csk Double Nickase Plasmid (h) e il Csk Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CSK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Csk Antibody (E-3): sc-166560
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Csk Plasmide Double Nickase (h) | sc-400992-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Csk Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400992-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSK codifica Csk, una tirosin-chinasi citosolica che regola negativamente le chinasi della famiglia Src fosforilando la tirosina inibitoria C-terminale, limitando così l’ampiezza della segnalazione a valle dei recettori immunitari, delle integrine e dei recettori per i fattori di crescita. Attraverso questa funzione di “controllo”, Csk influenza l’adesione e la migrazione cellulare, il rimodellamento del citoscheletro e la trasduzione del segnale prossimale al recettore in vie quali la segnalazione del recettore delle cellule T e la segnalazione delle adesioni focali. Alterazioni dell’attività o della regolazione di CSK possono perturbare le reti di fosforilazione che determinano le soglie di attivazione delle cellule immunitarie e i programmi di segnalazione proliferativa. Un controllo deregolato delle chinasi della famiglia Src legato a CSK è stato associato a contesti di segnalazione immuno-mediata e oncogenica, a supporto del suo studio in modelli meccanicistici dell’omeostasi della segnalazione.
Csk Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CSK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CSK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CSK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CSK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.