CSH1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401213-ACT

CSH1 codifica l’ormone somatomammotropina corionica 1, un ormone glicoproteico placentare della famiglia dell’ormone della crescita/prolattina che modula l’adattamento metabolico materno e sostiene la crescita fetale durante la gravidanza. CSH1 è espresso prevalentemente dai sinciziotrofoblasti e agisce attraverso vie di segnalazione associate ai recettori delle citochine, incluse JAK/STAT e programmi trascrizionali correlati che coordinano la ripartizione dei nutrienti, la sensibilità all’insulina e le risposte lattogeniche. In letteratura, un’alterata espressione placentare di CSH1 è stata associata a compromissione della funzione placentare e a fenotipi avversi della gravidanza, rendendolo un utile indicatore molecolare della differenziazione dei trofoblasti e della biologia endocrina placentare. In ambito di ricerca, CSH1 è comunemente utilizzato come marcatore e nodo funzionale all’interno di vie che regolano lo sviluppo placentare, la secrezione ormonale e la comunicazione materno-fetale.

CSH1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CSH1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CSH1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CSH1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CSH1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CSH1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CSH1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CSH1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CSH1 nelle cellule tumorali con espressione di CSH1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.