CSA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403428-ACT

ERCC8はコケイン症候群Aタンパク質（CSA）をコードしており、CSAはCRL4^CSA E3ユビキチンリガーゼ複合体における基質認識コンポーネントとして機能するWD40リピート因子である。CSAは転写共役ヌクレオチド除去修復（TC-NER）の中核を担い、停止したRNAポリメラーゼII上での損傷認識を調整するとともに、修復機構および転写機構をユビキチン依存的にリモデリングして、UV誘発損傷後の遺伝子発現回復を促進する。CSAはCSB/ERCC6や他のNER因子との相互作用を通じてゲノム安定性の維持に寄与し、遺伝毒性ストレス後の転写回復を支える。病的なERCC8バリアントはコケイン症候群および関連するUV感受性、神経発達異常、早老様表現型と関連しており、CSAの制御はDNA修復能やストレス応答シグナル伝達の研究において重要である。

CSA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ERCC8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CSA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ERCC8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はERCC8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CSAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のERCC8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCSA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびERCC8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCSA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。