Partículas Lentivirales de Activación (h2) CRABP-II: sc-402978-LAC-2

El gen humano CRABP2 codifica la proteína celular de unión al ácido retinoico II (CRABP-II), un transportador citosólico de alta afinidad que amortigua el ácido retinoico todo-trans y facilita su entrega a los receptores nucleares de ácido retinoico para modular programas de transcripción dependientes de retinoides. Al controlar la disponibilidad del ligando y su tráfico subcelular, CRABP-II influye en la diferenciación epitelial, la maduración de los queratinocitos y otros procesos impulsados por el ácido retinoico, vinculándose así con la regulación de la proliferación, la apoptosis y redes génicas del desarrollo. La expresión desregulada de CRABP2 y la señalización retinoide alterada se han asociado con la biología del cáncer y trastornos inflamatorios de la piel, lo que convierte a este blanco en un elemento relevante para estudiar la reprogramación de vías y respuestas específicas al ácido retinoico según el contexto. La edición genética centrada en CRABP2 permite el análisis mecanístico de la señalización del ácido retinoico, el mapeo de cambios transcripcionales y de cromatina aguas abajo de la activación de los RAR, y el cribado funcional en modelos de diferenciación y tumorigénesis.

Las partículas de activación lentiviral CRABP-II (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CRABP2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CRABP-II (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CRABP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CRABP-II. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CRABP2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.