CPOX Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405130
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CPOX El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CPOX, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CPOX Anticuerpo (B-9): sc-393388
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CPOX Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405130 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La coproporfirinógeno oxidasa (CPOX) es una enzima mitocondrial que cataliza la descarboxilación oxidativa del coproporfirinógeno III a protoporfirinógeno IX, un paso tardío clave en la vía de biosíntesis del hemo. Al controlar el flujo a través del metabolismo de las porfirinas, CPOX sustenta procesos dependientes del hemo, como la respiración mitocondrial, la función de los citocromos y la homeostasis redox celular. La alteración de la actividad de CPOX se asocia con la acumulación de intermediarios porfirínicos y se ha relacionado con la coproporfiria hereditaria y fenotipos metabólicos afines. Por ello, CPOX constituye un nodo mecanísticamente informativo para estudiar el metabolismo mitocondrial, las respuestas al estrés oxidativo y la regulación de la vía del hemo/porfirinas en células humanas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CPOX (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CPOX en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CPOX junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CPOX tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CPOX.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CPOX para la investigación de la señalización de CPOX, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CPOX críticos para la función de CPOX
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CPOX para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CPOX CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CPOX CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CPOX. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CPOX (h) y el plásmido HDR CPOX (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CPOX para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CPOX definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.