Plasmide Double Nickase (h) CPE: sc-404429-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CPE correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CPE Double Nickase (h) et le plasmide CPE Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CPE. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CPE Antibody (H-6): sc-393760
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CPE | sc-404429-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CPE | sc-404429-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La carboxypeptidase E (CPE) est une exopeptidase de la voie sécrétoire qui élimine les résidus basiques en position C-terminale des intermédiaires de prohormones et de proneuropeptides, favorisant ainsi la maturation de peptides bioactifs dans les cellules endocrines et neuroendocrines. Au-delà de son rôle catalytique, la CPE participe au trafic des granules de sécrétion à cœur dense et à la sécrétion régulée, reliant le processing des peptides au tri vésiculaire et à la libération couplée à un stimulus. Une expression ou une fonction altérée de la CPE a été associée à des perturbations de l’homéostasie métabolique et neuroendocrinienne, et a été étudiée dans des contextes tels que des phénotypes liés à l’obésité, une susceptibilité au diabète et des dysfonctionnements neurologiques. Ces caractéristiques font de la CPE un nœud utile pour analyser la biosynthèse des hormones peptidiques, la biologie des granules de sécrétion et les réseaux de signalisation dépendant de neuropeptides maturés.
CPE Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CPE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CPE. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CPE. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CPE.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.