20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
El Plásmdo de Activación CRISPR (h) COX5a es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) COX5a incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR COX5a (h) y el plásmido de activación CRISPR COX5a (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de COX5A. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: COX5a Anticuerpo (A-5): sc-376907