Plasmide Double Nickase (h) connexin 32: sc-402378-NIC

GJB1 code la connexine 32 (Cx32), une protéine de canal des jonctions communicantes qui forme des conduits intercellulaires pour les ions et les petits métabolites, permettant un couplage électrique et métabolique entre cellules voisines. Cx32 est particulièrement abondante dans les cellules de Schwann myélinisantes ainsi que dans d’autres tissus épithéliaux, où elle contribue à l’homéostasie tissulaire en coordonnant la signalisation, l’équilibre rédox et les réponses aux lésions. En régulant la communication intercellulaire via les jonctions communicantes, la connexine 32 influence des processus tels que l’excitabilité membranaire, la différenciation cellulaire et les voies de signalisation du stress. Les altérations génétiques de GJB1 sont fortement associées à des neuropathies périphériques héréditaires, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques sur le maintien de la myéline et les défauts de communication cellule–cellule.

connexin 32 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GJB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GJB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GJB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GJB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.