Plásmido CRISPR de Activación (h) COL11A1: sc-403512-ACT

COL11A1 codifica la cadena α1 del colágeno tipo XI, un colágeno fibrilar cuantitativamente minoritario pero estructuralmente crítico que regula la nucleación de las fibrillas de colágeno, su diámetro y la organización de la matriz extracelular (MEC) en los tejidos conectivos. COL11A1 se integra en fibrillas heterotípicas junto con los colágenos II y IX, contribuyendo a la biomecánica del cartílago e influyendo en la adhesión célula–matriz, la migración y las vías de mecanotransducción que moldean la arquitectura tisular. La alteración de la expresión de COL11A1 y la remodelación de la MEC se asocian con fenotipos esqueléticos del desarrollo y se han vinculado a programas estromales asociados a tumores, donde la composición de la matriz puede modular la señalización relacionada con la invasión. Como componente de la matriz, COL11A1 se estudia con frecuencia en el contexto del ensamblaje de la MEC, la condrogénesis y la regulación del comportamiento celular dependiente del microambiente.

COL11A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COL11A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

COL11A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COL11A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COL11A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de COL11A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COL11A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de COL11A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía COL11A1 en células tumorales con expresión de COL11A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.