Plasmide CRISPR d'Activation (h) claudin-6: sc-403405-ACT

CLDN6 code la claudine-6, une protéine tétraspannique des jonctions serrées qui contribue à la formation de la barrière épithéliale, à la polarité apico-basale et à la perméabilité paracellulaire sélective. En participant à des complexes de jonctions serrées avec d’autres claudines et des protéines d’échafaudage telles que TJP1/ZO-1, la claudine-6 aide à coordonner l’adhésion cellule–cellule et la signalisation jonctionnelle, en interface avec les programmes de différenciation et la morphogenèse épithéliale. Une expression altérée de CLDN6 a été rapportée dans de multiples contextes cancéreux ainsi que dans des modèles du développement, où une intégrité dérégulée des jonctions serrées peut influencer l’invasion, des phénotypes associés aux métastases et la plasticité épithéliale. Ainsi, CLDN6 est fréquemment étudié comme marqueur et régulateur fonctionnel du remodelage des jonctions et des transitions d’état de lignée dans les systèmes épithéliaux humains.

claudin-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CLDN6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

claudin-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CLDN6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CLDN6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de claudin-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CLDN6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de claudin-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie claudin-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de CLDN6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.