Plásmido CRISPR de Activación (h) CHST1: sc-403978-ACT

CHST1 codifica la sulfotransferasa de carbohidratos 1, una enzima residente del Golgi que transfiere sulfato a residuos de galactosa en glicoproteínas y glicolípidos, contribuyendo a la biosíntesis de glicosaminoglucanos sulfatados y glicoconjugados relacionados. Al modelar los patrones de sulfatación en la superficie celular y en la matriz extracelular, CHST1 influye en las interacciones ligando–receptor, la adhesión de leucocitos y la señalización de factores de crecimiento/citoquinas dentro de las vías del metabolismo de la glicosilación y los proteoglucanos. La sulfatación alterada puede remodelar el glucocálix y modular el reconocimiento inmunitario y la migración celular, vinculando la actividad de CHST1 con mecanismos relevantes para la inflamación y el comportamiento de las células tumorales. Por ello, CHST1 es de interés para estudios sobre la regulación dependiente de glicanos de la señalización, la adhesión y las interacciones con el microambiente.

CHST1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHST1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CHST1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHST1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHST1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CHST1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHST1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CHST1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CHST1 en células tumorales con expresión de CHST1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.