CHMP1B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406531

Descripción general

CHMP1B (proteína 1B del cuerpo multivesicular cargada) es un componente central de la maquinaria ESCRT-III, que impulsa los eventos de remodelación de membranas necesarios para la clasificación endosomal y la biogénesis de cuerpos multivesiculares. A través de vías dependientes de ESCRT, CHMP1B contribuye a la regulación negativa de receptores, el tráfico lisosomal, la dinámica de membranas relacionada con la autofagia y la finalización de la abscisión durante la citocinesis. La actividad adecuada de CHMP1B ayuda a mantener la proteostasis y la homeostasis de señalización al regular el destino de la carga ubiquitinada y de las proteínas de membrana. La desregulación de la función de ESCRT-III, incluido el tráfico alterado dependiente de CHMP1B, se estudia con frecuencia en contextos de procesos neurodegenerativos, gemación viral y cambios asociados al cáncer en la señalización de receptores de factores de crecimiento.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CHMP1B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CHMP1B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CHMP1B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CHMP1B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CHMP1B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CHMP1B para la investigación de la señalización de CHMP1B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CHMP1B críticos para la función de CHMP1B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CHMP1B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CHMP1B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CHMP1B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CHMP1B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CHMP1B (h) y el plásmido HDR CHMP1B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CHMP1B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CHMP1B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.