ChM-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403523

Übersicht

CNMD kodiert Chondromodulin-1 (ChM-1), ein aus Knorpel stammendes, sezerniertes Glykoprotein, das daran beteiligt ist, das avaskuläre Mikromilieu des Knorpels aufrechtzuerhalten, indem es das Verhalten von Endothelzellen und die Homöostase der extrazellulären Matrix moduliert. ChM-1 ist mit chondrogenen Differenzierungsprogrammen und Gewebeumbauprozessen verknüpft, die in muskuloskelettalen Geweben Matrixablagerung, Zelladhäsion und lokale Wachstumsfaktor-Signalgebung koordinieren. Eine veränderte CNMD-Expression wurde im Zusammenhang mit Knorpeldegeneration und -reparatur beschrieben, was seine Nutzung als molekularen Ansatzpunkt für die Untersuchung der osteoartikulären Biologie unterstützt. Darüber hinaus ist die Aktivität von CNMD/ChM-1 für Untersuchungen zur Unterdrückung der Angiogenese und zu matrixregulierter Signalübertragung in Entwicklung und krankheitsassoziiertem Gewebeumbau relevant.

Das ChM-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CNMD-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CNMD-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CNMD nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ChM-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CNMD-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ChM-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CNMD-Exone abzielen, die für die ChM-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CNMD-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ChM-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ChM-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CNMD-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ChM-1 HDR-Plasmid (h) und ChM-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CNMD-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CNMD-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.