Plásmido CRISPR de Activación (m) CH25H: sc-419641-ACT
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (m) CH25H es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (m) CH25H incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR CH25H (m) y el plásmido de activación CRISPR CH25H (m2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de Ch25h. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CH25H Anticuerpo (1G8): sc-293256
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (m) CH25H | sc-419641-ACT | 20 µg | $397.00 |
Ch25h codifica la colesterol 25-hidroxilasa (CH25H), una enzima asociada al retículo endoplásmico que convierte el colesterol en 25-hidroxicolesterol, un oxiesterol bioactivo que modula la homeostasis de los esteroles y la composición lipídica de las membranas. Mediante la regulación de la biosíntesis de colesterol impulsada por SREBP y de programas transcripcionales dependientes de LXR, CH25H influye en el metabolismo lipídico, el tráfico vesicular y la señalización inflamatoria. En células inmunes de ratón, Ch25h es inducible por estímulos de la inmunidad innata y puede moldear los estados de activación de macrófagos y microglía al alterar redes de señalización mediadas por oxiesteroles. La actividad desregulada de CH25H y la producción de 25-hidroxicolesterol se han vinculado con respuestas inflamatorias aberrantes y vías de estrés metabólico, lo que convierte a Ch25h en un nodo útil para estudiar la intercomunicación inmunometabólica en modelos relevantes de enfermedad.
CH25H El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ch25h sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
CH25H El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ch25h en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ch25h, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CH25H. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ch25h y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CH25H en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CH25H en células tumorales con expresión de Ch25h silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.