Plásmido CRISPR de Activación (h) CGNL1: sc-405346-ACT

CGNL1 (cingulin-like 1) codifica una proteína de andamiaje asociada a las uniones estrechas, que se localiza en los contactos célula-célula de células epiteliales y endoteliales y ayuda a organizar la arquitectura de las uniones. Conecta los complejos de unión con el citoesqueleto de actina y participa en la regulación de la función de barrera, la polaridad y el ensamblaje de las uniones mediante vías que involucran la señalización de GTPasas de la familia Rho y la remodelación del citoesqueleto. Al influir en la permeabilidad paracelular y en la señalización dependiente del contacto, CGNL1 es relevante para estudios sobre la integridad tisular, la alteración de la barrera asociada a la inflamación y las señales del microambiente que moldean la migración celular. Los cambios en la regulación de las uniones y en la dinámica del citoesqueleto vinculados a la biología de CGNL1 se examinan con frecuencia en contextos como las transiciones epitelio-mesenquimales, la permeabilidad vascular y las modificaciones de adhesión asociadas al cáncer.

CGNL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CGNL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CGNL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CGNL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CGNL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CGNL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CGNL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CGNL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CGNL1 en células tumorales con expresión de CGNL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.