Plásmido Doble Nickase (h) CDw75/ST6GAL1: sc-402881-NIC

ST6GAL1 (CDw75) codifica la β-galactósido α-2,6-sialiltransferasa 1, una enzima localizada en el aparato de Golgi que cataliza la sialilación terminal α2,6 de glicanos N‑ligados en glicoproteínas de membrana y secretadas. Esta modificación determina el plegamiento de las glicoproteínas, la estabilidad de los receptores y el reconocimiento de ligandos, influyendo en las interacciones célula‑célula, la modulación inmunitaria y la transducción de señales mediante eventos de unión dependientes de glicanos alterados. La actividad de ST6GAL1 contribuye a la regulación del glicoma de superficie de células B y epiteliales e impacta procesos como la adhesión, la migración y la apoptosis. La expresión desregulada de ST6GAL1 y los patrones de α2,6‑sialilación se han asociado con cambios en el comportamiento de las células tumorales, inflamación y susceptibilidad a infecciones, lo que la convierte en un nodo clave para la glicobiología y la investigación de mecanismos de enfermedad.

CDw75/ST6GAL1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ST6GAL1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ST6GAL1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ST6GAL1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ST6GAL1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.