Plásmido CRISPR de Activación (h) CDw75/ST6GAL1: sc-402881-ACT

ST6GAL1 (CDw75) codifica una α2,6-sialiltransferasa de β-galactósidos residente en el aparato de Golgi que incorpora ácido siálico enlazado en α2,6 a los N-glicanos, moldeando la composición de las glucoproteínas de la superficie celular y la función de los receptores. Al modular interacciones dependientes de glicanos, ST6GAL1 influye en el tráfico de proteínas, el reconocimiento inmunitario y las salidas de señalización vinculadas a vías de adhesión y supervivencia. La actividad alterada de ST6GAL1 y los patrones de α2,6-sialilación se han asociado con diferenciación desregulada, señalización inflamatoria y fenotipos de glicosilación asociados a tumores. En sistemas modelo humanos, ST6GAL1 se estudia ampliamente por su impacto en la unión de lectinas, los epítopos CDw75 asociados a células B y la regulación de receptores dependiente de la glicosilación.

CDw75/ST6GAL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ST6GAL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CDw75/ST6GAL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ST6GAL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ST6GAL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CDw75/ST6GAL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ST6GAL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CDw75/ST6GAL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CDw75/ST6GAL1 en células tumorales con expresión de ST6GAL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.