Plásmido Doble Nickase (h) CDKN1B/Kip1 p27: sc-400074-NIC

CDKN1B codifica p27Kip1, un inhibidor de quinasas dependientes de ciclina que frena la progresión impulsada por CDK2 y CDK4/6 a través del punto de control G1/S mediante la modulación de los complejos ciclina E/A–CDK2 y ciclina D–CDK4/6. p27 integra señales mitogénicas y señales inhibidoras del crecimiento para controlar la detención del ciclo celular, la quiescencia celular y la diferenciación, con una regulación gobernada por la localización subcelular dependiente de fosforilación y el recambio proteasomal mediado por ligasas de ubiquitina SCF. La expresión o estabilidad alteradas de CDKN1B se vinculan con frecuencia a una proliferación desregulada y a un control anómalo de los puntos de control, lo que lo hace relevante para estudios de señalización oncogénica, compromiso de linaje y respuestas al estrés en células humanas.

CDKN1B/Kip1 p27 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDKN1B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDKN1B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDKN1B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDKN1B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.