Cdc20B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406774

Panoramica

CDC20B (cell division cycle 20B) codifica una proteina simile a Cdc20 che si prevede partecipi alla regolazione associata al ciclo cellulare, con somiglianza di sequenza con i co-attivatori dell’APC/C che coordinano la proteolisi mediata da ubiquitina durante la progressione mitotica. Sebbene sia meno caratterizzato di CDC20, l’espressione di CDC20B e il suo contesto genomico sono stati collegati a programmi proliferativi e a stati di differenziazione in tessuti selezionati, suggerendo un ruolo nel controllo di transizioni che accoppiano la tempistica del ciclo cellulare al rimodellamento cellulare. La perturbazione di CDC20B potrebbe quindi influenzare vie che regolano il controllo dei checkpoint, la stabilità cromosomica e il turnover proteico regolato. Questi processi risultano spesso alterati nel cancro e in altri disturbi caratterizzati da proliferazione deregolata, rendendo CDC20B un bersaglio utile per studi meccanicistici sul controllo della crescita.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc20B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDC20B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDC20B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDC20B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cdc20B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDC20B per lo studio della segnalazione di Cdc20B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDC20B critici per la funzione di Cdc20B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDC20B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Cdc20B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Cdc20B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDC20B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Cdc20B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Cdc20B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDC20B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDC20B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.