Cdc2 p34 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419582

Descripción general

Cdk1 codifica la quinasa dependiente de ciclina Cdc2 p34, un motor central de la progresión del ciclo celular que controla la entrada en mitosis y coordina los puntos de control mediante la fosforilación de múltiples sustratos. En complejo con ciclinas, CDK1 regula la dinámica de los centrosomas, la condensación cromosómica, la ruptura de la envoltura nuclear y el ensamblaje del huso, integrando señales de las respuestas al daño del ADN mediadas por ATM/ATR y de las vías de estrés replicativo. Dado que la actividad de CDK1 condiciona la estabilidad del genoma y la capacidad proliferativa, la regulación alterada del eje CDK1–ciclina se asocia con frecuencia a fenotipos hiperproliferativos, aneuploidía y reprogramación del ciclo celular relacionada con tumores. Por ello, los modelos murinos de Cdk1 se utilizan ampliamente para desentrañar mecanismos conservados de control mitótico, fidelidad de los puntos de control y transiciones de la replicación a la mitosis en contextos de desarrollo y relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cdc2 p34 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cdk1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cdk1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cdk1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cdc2 p34.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cdk1 para la investigación de la señalización de Cdc2 p34, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cdk1 críticos para la función de Cdc2 p34
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cdk1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Cdc2 p34 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Cdc2 p34 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cdk1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cdc2 p34 (m) y el plásmido HDR Cdc2 p34 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cdk1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cdk1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.