Plásmido Doble Nickase (h) CD98: sc-400501-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CD98 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD98 (h) y el plásmido de doble nickasa CD98 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SLC3A2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD98 Anticuerpo (E-5): sc-376815
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CD98 | sc-400501-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CD98 | sc-400501-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC3A2 codifica CD98 (también conocido como la cadena pesada 4F2), una glucoproteína de membrana tipo II que forma heterodímeros con cadenas ligeras de SLC7 para facilitar el transporte de aminoácidos y la detección celular de nutrientes. CD98 también modula la adhesión y la señalización dependientes de integrinas, conectando el transporte de membrana con la organización del citoesqueleto, la proliferación y vías de supervivencia como PI3K–AKT y MAPK. A través de estas funciones, SLC3A2 influye en el equilibrio redox y en programas metabólicos regulados por mTORC1 que determinan el crecimiento y las respuestas al estrés. La expresión y señalización desreguladas de CD98 se han asociado con cambios en la migración celular, la activación de células inmunitarias y características de la biología tumoral, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos sobre metabolismo y señalización de adhesión.
CD98 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC3A2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC3A2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC3A2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC3A2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.