CD88 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419395

Übersicht

C5ar1 kodiert CD88, den kanonischen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor für das Komplement-Anaphylatoxin C5a, und wird stark auf Zellen der myeloischen Linie exprimiert, darunter Neutrophile, Monozyten und Makrophagen. Nach Ligandenbindung aktiviert CD88 eine Gi-abhängige Signalübertragung, die Chemotaxis, Kalziummobilisierung, MAPK- und PI3K-Signalwege, oxidativen Burst und Zytokinproduktion auslöst und damit Komplementsignale mit der Aktivierung der angeborenen Immunität verknüpft. Dieser Rezeptor trägt zur Verstärkung von Entzündungen und zur Rekrutierung von Leukozyten bei und überschneidet sich mit der Signalgebung von Fc-Rezeptoren sowie Mustererkennungswegen, wodurch Gewebeschädigung und Reparaturreaktionen mitgeprägt werden. Eine fehlregulierte C5a–CD88-Signalgebung wurde in Modellen für Sepsis, autoimmune Entzündung, Ischämie-Reperfusionsschaden und Neuroinflammation beschrieben, was C5ar1 zu einem hilfreichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien in der Immunpathologie macht.

Das CD88 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des C5ar1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des C5ar1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von C5ar1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD88-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von C5ar1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD88-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf C5ar1-Exone abzielen, die für die CD88-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere C5ar1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CD88 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CD88 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des C5ar1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD88 HDR-Plasmid (m) und CD88 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von C5ar1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten C5ar1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.