Plásmido CRISPR de Activación (h) CD72: sc-404054-ACT

CD72 es una glucoproteína transmembrana de tipo II restringida a las células B que actúa como correceptor inhibidor para ajustar los umbrales de señalización del receptor de células B (BCR) y mantener la homeostasis inmunitaria. A través de su motivo ITIM citoplasmático, CD72 recluta fosfatasas como SHP-1 para atenuar las cascadas de quinasas proximales y modular vías posteriores, incluidas MAPK y NF-κB, influyendo en la activación, proliferación y tolerancia de las células B. CD72 también participa en interacciones reguladoras con ligandos como SEMA4D/CD100, integrando señales que afectan las respuestas impulsadas por antígenos y la dinámica del centro germinal. La expresión o señalización desregulada de CD72 se ha vinculado con una función alterada de las células B y es relevante para estudios de autoinmunidad, neoplasias de células B y la regulación de puntos de control inmunitarios en el microambiente tumoral.

CD72 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD72 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD72 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD72 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD72, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD72. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD72 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD72 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD72 en células tumorales con expresión de CD72 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.