Plásmido CRISPR de Activación (m) CD36: sc-419545-ACT

El gen Cd36 de ratón codifica CD36, un receptor depurador (scavenger) multifuncional de clase B que se une a ácidos grasos de cadena larga y a lipoproteínas oxidadas para regular la captación de lípidos, el manejo intracelular de lípidos y el metabolismo energético. CD36 participa en vías que controlan el transporte de ácidos grasos, la señalización inflamatoria y la formación de células espumosas de macrófagos, conectando la detección de nutrientes con las respuestas inmunitarias innatas. Además de sus funciones en el metabolismo del tejido adiposo, el músculo y el hígado, la actividad de CD36 influye en la biología vascular y en las respuestas al estrés oxidativo mediante interacciones con lípidos modificados. La expresión o señalización desregulada de Cd36 se ha asociado con fenotipos cardiometabólicos, procesos relacionados con la resistencia a la insulina y patologías impulsadas por la inflamación en modelos murinos.

CD36 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cd36 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD36 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cd36 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cd36, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD36. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cd36 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD36 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD36 en células tumorales con expresión de Cd36 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.