Plásmido Doble Nickase (h) CD35: sc-401210-NIC

CR1 codifica el receptor del complemento 1 (CD35), una glucoproteína de superficie celular que se une a C3b/C4b para favorecer la eliminación de complejos inmunitarios y regular la activación del complemento en las células del huésped. CD35 participa en la vigilancia inmunitaria innata al favorecer la opsonización y la fagocitosis, y al limitar la inflamación excesiva mediada por el complemento, con funciones destacadas en eritrocitos, leucocitos y células presentadoras de antígeno. A través de estas interacciones, CR1 influye en las respuestas de las células B y en el manejo de antígenos en los tejidos linfoides, vinculando la biología del complemento con la modulación de la inmunidad adaptativa. La variación genética y de expresión de CR1 se ha asociado con patología impulsada por complejos inmunitarios y con contextos de enfermedad inflamatoria, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de la regulación del complemento.

CD35 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.