Plásmido CRISPR de Activación (h) CD300E: sc-415572-ACT

CD300E codifica un inmunorreceptor de la familia CD300 que se expresa predominantemente en células del linaje mieloide, donde participa en la regulación de la activación de la inmunidad innata. La activación de CD300E influye en redes de señalización que coordinan la producción de citocinas inflamatorias, la activación de fagocitos y la función de las células presentadoras de antígeno, interactuando con vías asociadas a ITAM y cascadas de quinasas aguas abajo que moldean las respuestas celulares frente a patógenos y al daño tisular. Al modular los estados de activación mieloide, CD300E es relevante para estudios de desregulación inmunitaria en inflamación crónica, autoinmunidad y remodelación mieloide asociada a tumores. Su dinámica de expresión y su salida de señalización lo convierten en una herramienta molecular útil para diseccionar el control mediado por receptores en monocitos, macrófagos y células dendríticas.

CD300E El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD300E sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD300E El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD300E en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD300E, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD300E. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD300E y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD300E en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD300E en células tumorales con expresión de CD300E silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.