Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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CBS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400877
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CBS O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CBS, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CBS Anticorpo (B-4): sc-133154
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CBS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400877 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
A cistationina beta-sintase (CBS) é uma enzima dependente de fosfato de piridoxal que catalisa a condensação de serina e homocisteína para formar cistationina, comprometendo a homocisteína com a via de transulfuração. Ao conectar o metabolismo de um carbono à biossíntese de cisteína, a CBS influencia o equilíbrio redox celular por meio da produção downstream de glutationa e contribui para a homeostase dos aminoácidos sulfurados. A atividade da CBS também sustenta a geração endógena de sulfeto de hidrogênio, impactando a função mitocondrial e a sinalização responsiva ao estresse. A desregulação da CBS está associada à hiper-homocisteinemia e a erros inatos do metabolismo do enxofre, e a expressão alterada de CBS tem sido estudada em contextos de estresse oxidativo e reprogramação metabólica relevantes para fenótipos cardiovasculares e do neurodesenvolvimento.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CBS (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CBS em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CBS, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CBS na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CBS.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CBS para a investigação da sinalização de CBS, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CBS críticos para a função CBS
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CBS para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CBS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CBS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CBS. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CBS Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CBS (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CBS para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CBS definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.