caveolin-3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400569-ACT

Das humane Gen **CAV3** kodiert Caveolin-3, eine in Muskelgewebe stark angereicherte strukturelle Komponente der Caveolae, die Membran-Mikrodomänen organisiert und Signalproteine am Sarkolemm verankert. Caveolin-3 beeinflusst Mechanotransduktion, Lipidhomöostase und rezeptorassoziierte Signalwege, indem es die Kompartimentierung von Ionenkanälen und Kinasen moduliert, die an der Muskelerregbarkeit und am Stoffwechsel beteiligt sind. Störungen der **CAV3**-Expression oder der caveolären Architektur werden mit Dysfunktionen der Skelett- und Herzmuskulatur in Verbindung gebracht, einschließlich bestimmter Formen der Muskeldystrophie und Kardiomyopathie, was seine Bedeutung für die Stabilität von Muskelfasern und Stressantworten untermauert. Diese Eigenschaften machen Caveolin-3 zu einem hilfreichen Ausgangspunkt für die Untersuchung von Membrantransport, Signaltransduktion und Muskelzelldifferenzierung in humanen Modellsystemen.

caveolin-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CAV3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

caveolin-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CAV3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CAV3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen caveolin-3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CAV3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von caveolin-3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des caveolin-3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CAV3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.