Particules Lentivirales d'Activation (h) caveolin-1: sc-400102-LAC

CAV1 code pour la cavéoline‑1, une protéine d’échafaudage intégrale de la membrane qui organise les cavéoles et coordonne la transduction du signal à la membrane plasmique. La cavéoline‑1 régule l’endocytose, l’homéostasie des lipides et du cholestérol, ainsi que la mécanotransduction, et module des voies incluant la signalisation intégrine/FAK, l’activité des kinases de la famille Src, la signalisation de l’oxyde nitrique endothélial et le remodelage lié au TGF‑β. Par ses effets sur le trafic des récepteurs et la composition des microdomaines membranaires, la cavéoline‑1 influence la migration cellulaire, la fonction de barrière et les réponses au stress. Une expression dérégulée de CAV1 et une dynamique altérée des cavéoles ont été associées à des phénotypes cardiovasculaires et métaboliques, à des processus liés à la fibrose et à des comportements cellulaires associés aux tumeurs, ce qui soutient sa large utilité comme nœud de voie dans les études de biologie cellulaire et moléculaire.

Les particules d'activation lentivirales caveolin-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CAV1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales caveolin-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CAV1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de caveolin-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CAV1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.