Plásmido Doble Nickase (h) cathepsin H: sc-402601-NIC

CTSH codifica la catepsina H, una proteasa cisteínica lisosomal que funciona principalmente como aminopeptidasa y contribuye a las etapas finales del recambio intracelular de proteínas. Participa en el tráfico endolisosomal y en el procesamiento proteolítico, influyendo en el procesamiento de antígenos, la remodelación de la matriz extracelular y la regulación de la disponibilidad de hormonas peptídicas o factores de crecimiento en contextos celulares específicos. La actividad desregulada de las catepsinas se ha relacionado con alteraciones de la proteostasis, la señalización inflamatoria y comportamientos celulares invasivos, lo que convierte a CTSH en una diana frecuente en estudios de respuestas al estrés dependientes de lisosomas. La expresión y actividad de CTSH también se investigan en biología tumoral y en la función de células inmunitarias, donde el equilibrio de las proteasas lisosomales puede modular las interacciones con el microambiente.

cathepsin H El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CTSH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CTSH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CTSH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CTSH alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.