Plásmido CRISPR de Activación (m) catalase: sc-419459-ACT

Mouse Cat codifica la catalasa, una enzima peroxisomal con grupo hemo que descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno para mantener el equilibrio redox celular. Al limitar la acumulación de H2O2, la catalasa modula la señalización de las especies reactivas de oxígeno, protege los lípidos y las proteínas del daño oxidativo y favorece la coordinación metabólica entre peroxisomas y mitocondrias. La actividad de Cat se integra con las redes de defensa antioxidante y las respuestas al estrés inflamatorio, influyendo en procesos como la senescencia, la regulación de la apoptosis y la adaptación metabólica. Las alteraciones en la función o la expresión de la catalasa se estudian con frecuencia en contextos de fenotipos asociados al estrés oxidativo, incluida la neurodegeneración, la disfunción cardiometabólica y modelos de lesión tisular en sistemas murinos.

catalase El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cat sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

catalase El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cat en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cat, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de catalase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cat y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de catalase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía catalase en células tumorales con expresión de Cat silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.