Plasmide CRISPR d'Activation (h) CaSR: sc-401749-ACT

Le gène humain **CASR** code le récepteur sensible au calcium (CaSR), un GPCR de classe C qui détecte les variations de Ca2+ extracellulaire et coordonne l’homéostasie calcique. La signalisation de CaSR mobilise des voies dépendantes des protéines G, notamment la mobilisation du calcium médiée par PLC/IP3, la signalisation MAPK/ERK et la régulation de l’AMPc, modulant ainsi les réponses cellulaires dans la parathyroïde, le rein et d’autres tissus impliqués dans l’équilibre des ions minéraux. En modulant des processus de sécrétion et de transport, CaSR influence la dynamique de la parathormone et la gestion rénale du calcium et du phosphate. Une activité ou une expression altérée de **CASR** est associée à des troubles du métabolisme calcique et a été étudiée dans des contextes tels que les dysfonctions endocriniennes et des programmes de signalisation liés au cancer.

CaSR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CASR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CaSR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CASR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CASR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CaSR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CASR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CaSR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CaSR dans les cellules tumorales présentant une expression de CASR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.