CAMTA1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405328-ACT

ヒトCAMTA1は、カルモジュリン結合性転写活性化因子1（calmodulin-binding transcription activator 1）をコードしており、Ca2+/カルモジュリンシグナル伝達と転写制御を統合する核内のDNA結合タンパク質です。CAMTA1は、クロマチンに関連した転写制御における役割と整合して、神経分化、シナプス機能、細胞ストレス応答に結び付いた遺伝子発現プログラムの制御に関与します。CAMTA1活性の変化は神経発達に関わる表現型や小脳機能障害と関連付けられており、またCAMTA1に影響するゲノム変化が複数の腫瘍プロファイリング研究で報告されています。これらは、疾患関連の転写ネットワーク研究における標的としての有用性を支持するものです。こうした特徴により、CAMTA1はカルシウム依存的な転写経路と、その下流にある遺伝子制御回路を解明するうえで有用な結節点となります。

CAMTA1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CAMTA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CAMTA1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CAMTA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCAMTA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CAMTA1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCAMTA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCAMTA1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCAMTA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCAMTA1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。