Calponin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419719-ACT

O gene Cnn1 de camundongo codifica a calponina 1, uma proteína de ligação à actina enriquecida no músculo liso diferenciado, onde modula o comportamento contrátil ao regular as interações actina–miosina e a organização do citoesqueleto. A calponina 1 participa do controle dependente de cálcio da dinâmica actomiosina e está associada à sinalização RhoA/ROCK, à remodelação de adesões focais e à alternância fenotípica entre estados contrátil e sintético do músculo liso. Alterações na expressão de CNN1 são usadas como indicadores de diferenciação do músculo liso e de remodelamento vascular, com relevância para processos como hiperplasia neointimal, programas de miofibroblastos associados à fibrose e mudanças na biomecânica tecidual. Como reguladora do citoesqueleto, a calponina 1 oferece um ponto funcional para estudar mecanotransdução, migração e sinalização induzida pela matriz extracelular em modelos de músculo liso vascular e de vias aéreas.

Calponin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cnn1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Calponin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cnn1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cnn1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Calponin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cnn1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Calponin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Calponin 1 em células tumorais com expressão de Cnn1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.