Calpain 2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401113

Panoramica

CAPN2 codifica la calpaina 2, una proteasi cisteinica ubiquitariamente espressa e dipendente dal Ca²⁺, che svolge una proteolisi limitata di proteine del citoscheletro e della segnalazione per rimodellare l’architettura cellulare. L’attività della calpaina 2 contribuisce al turnover delle adesioni focali, al traffico di membrana e alla modulazione della segnalazione mediata da chinasi e fosfatasi, intersecando vie che controllano migrazione, sopravvivenza e risposte allo stress. Attraverso la clivazione regolata di substrati coinvolti nella progressione del ciclo cellulare e nell’apoptosi, CAPN2 aiuta a modulare la proteostasi e la segnalazione adattativa durante l’infiammazione e il rimodellamento tissutale. Un’attività deregolata della calpaina 2 è stata associata a motilità aberrante e fenotipi invasivi, a processi neurodegenerativi legati a un afflusso eccitotossico di calcio e a risposte alterate allo stress ossidativo o meccanico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Calpain 2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CAPN2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CAPN2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CAPN2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Calpain 2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CAPN2 per lo studio della segnalazione di Calpain 2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CAPN2 critici per la funzione di Calpain 2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CAPN2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Calpain 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Calpain 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CAPN2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Calpain 2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Calpain 2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CAPN2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CAPN2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.