Calpain 15 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411016-ACT

O gene humano **CAPN15** codifica a **calpaína 15**, um membro atípico da família das calpaínas, um grupo de proteases cisteínicas dependentes de cálcio implicadas na proteólise regulada que molda a renovação de proteínas e os resultados de sinalização. A atividade das calpaínas pode influenciar a remodelação do citoesqueleto, o tráfego vesicular e vias responsivas ao estresse por meio da clivagem limitada de substratos, em vez de degradação em massa, ajustando assim a homeostase celular. A expressão de **CAPN15** tem sido estudada no contexto do desenvolvimento tecidual e da regulação do estado celular, em que alterações na sinalização proteolítica podem impactar programas de diferenciação e a função neuronal ou epitelial. A proteólise desregulada relacionada às calpaínas tem sido associada na literatura a mecanismos relevantes para neurodegeneração, inflamação e sinalização associada ao câncer, sustentando **CAPN15** como um alvo para mapeamento de vias e genômica funcional.

Calpain 15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CAPN15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Calpain 15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CAPN15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CAPN15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Calpain 15. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CAPN15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Calpain 15 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Calpain 15 em células tumorais com expressão de CAPN15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.