Plasmide Double Nickase (h) Caldesmon: sc-402040-NIC

CALD1 code la caldésmone, une protéine se liant à l’actine et à la calmoduline, qui module les interactions actomyosine et stabilise l’architecture du cytosquelette dans les cellules musculaires lisses et non musculaires. En régulant, de manière dépendante du calcium, la dynamique des filaments d’actine et l’activité ATPase de la myosine, la caldésmone coordonne l’organisation des fibres de stress, le renouvellement des adhérences focales et les réponses contractiles qui influencent la forme cellulaire et la motilité. La fonction de CALD1 s’inscrit à l’interface du remodelage du cytosquelette piloté par les GTPases Rho et de voies de signalisation qui couplent la tension mécanique à des programmes transcriptionnels. Une expression altérée de la caldésmone ou un déséquilibre des isoformes a été associé à des modifications des phénotypes de migration et d’invasion en cancérologie, ainsi qu’à une dérégulation du comportement du muscle lisse pertinente pour le remodelage vasculaire et des processus fibroprolifératifs.

Caldesmon Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CALD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CALD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CALD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CALD1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.