Plásmido Doble Nickase (h) CA II: sc-401059-NIC

La anhidrasa carbónica II (CA II), codificada por el gen humano CA2, es una metaloenzima citosólica de alta actividad que cataliza la hidratación reversible del CO₂ a bicarbonato y protones, apoyando la regulación del pH intracelular y el transporte de CO₂/bicarbonato. Su actividad se acopla a procesos de homeostasis ácido-base y al transporte iónico mediante interacciones funcionales con transportadores de bicarbonato y vías de manejo de protones, lo que influye en la capacidad amortiguadora y el flujo metabólico. CA2 se expresa ampliamente y se utiliza con frecuencia como marcador de la biología de la anhidrasa carbónica en eritrocitos, riñón y tipos celulares relevantes para el tejido óseo, donde una química del bicarbonato alterada puede modificar la fisiología celular. Variantes o cambios en la expresión de CA2 se han asociado con trastornos del equilibrio ácido-base y con fenotipos de mineralización, lo que la convierte en un locus útil para estudios mecanísticos de señalización y metabolismo dependientes del pH.

CA II El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CA2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CA2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CA2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CA2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.