Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
C3aR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419392
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- C3aR El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico C3aR, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: C3aR Anticuerpo (D-12): sc-133172
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
C3aR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419392 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino **C3ar1** codifica el receptor del componente 3a del complemento (C3aR), un receptor acoplado a proteína G que se une a la anafilotoxina C3a generada durante la activación del complemento. La señalización de C3aR modula la quimiotaxis de leucocitos, la desgranulación, la liberación de citocinas y las respuestas vasculares, integrando señales de la inmunidad innata con vías posteriores dependientes de MAPK, PI3K/AKT y del calcio. En células mieloides, microglía y otros compartimentos sensibles a señales inmunes, C3aR contribuye tanto a la resolución como a la amplificación de la inflamación, según el contexto. La actividad desregulada de C3aR se ha implicado en modelos de inflamación alérgica de las vías respiratorias, patología autoinmune, inmunopatología asociada a infecciones y procesos neuroinflamatorios.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO C3aR (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen C3ar1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del C3ar1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de C3ar1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína C3aR.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en C3ar1 para la investigación de la señalización de C3aR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de C3ar1 críticos para la función de C3aR
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de C3ar1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido C3aR CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido C3aR CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus C3ar1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR C3aR (m) y el plásmido HDR C3aR (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología C3ar1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana C3ar1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.