Plasmide CRISPR d'Activation (h) c-IAP2: sc-400762-ACT

Le gène humain BIRC3 code c-IAP2, une ligase E3 d’ubiquitine à domaine RING qui régule l’apoptose et la signalisation inflammatoire en ubiquitinylant des composants clés des complexes du récepteur du TNF et en modulant l’activation des caspases. c-IAP2 participe au contrôle de la voie NF-κB, notamment via le dialogue entre les branches canonique et non canonique de la signalisation NF-κB, grâce à la régulation de la stabilité de NIK et à un contrôle dépendant de l’ubiquitine des événements de signalisation proximaux au récepteur. Par ces fonctions, BIRC3 influence la survie cellulaire, les réponses induites par les cytokines et l’adaptation au stress dans des contextes immunitaires et épithéliaux. Une dérégulation de l’expression ou de l’activité de BIRC3 a été associée à des modifications du seuil apoptotique et à une signalisation NF-κB aberrante observées dans plusieurs modèles pertinents pour la maladie, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans la recherche sur la mort cellulaire et l’inflammation.

c-IAP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BIRC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

c-IAP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BIRC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BIRC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de c-IAP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BIRC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de c-IAP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie c-IAP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de BIRC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.