Plásmido CRISPR de Activación (m) c-Fos: sc-420400-ACT

El gen Fos del ratón codifica el factor de transcripción de respuesta inmediata c-Fos, un componente del complejo AP-1 sensible a estímulos que forma heterodímeros con proteínas JUN para regular programas génicos que controlan la proliferación, la diferenciación, la adaptación al estrés y la plasticidad sináptica. c-Fos se induce rápidamente aguas abajo de la señalización MAPK/ERK, de vías dependientes de calcio y de cascadas mediadas por receptores acoplados a proteína G (GPCR), conectando señales extracelulares con la remodelación de la cromatina y de la transcripción. Como marcador ampliamente utilizado de la actividad neuronal y de los estados de activación celular, la expresión de Fos proporciona una lectura de la activación de vías en diversos tejidos. La actividad de AP-1 desregulada que involucra a c-Fos se ha asociado con señales inflamatorias alteradas y redes transcripcionales oncogénicas, lo que respalda su relevancia en modelos de biología tumoral y de regulación inmunitaria.

c-Fos El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Fos sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

c-Fos El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Fos en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Fos, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de c-Fos. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Fos y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de c-Fos en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía c-Fos en células tumorales con expresión de Fos silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.