c-Fgr CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420347-ACT

マウスFgrは、骨髄系細胞系譜に豊富に発現するSrcファミリーの非受容体型チロシンキナーゼであるc-Fgrをコードしており、免疫受容体、インテグリン、サイトカイン入力の下流でシグナルを伝達して、自然免疫応答を協調的に制御します。c-Fgrは、アクチン細胞骨格の再構築、細胞接着と遊走、貪食、活性酸素種（ROS）産生を制御するリン酸化カスケードに関与し、Fc受容体シグナル伝達や炎症性キナーゼネットワークなどの経路と統合されます。Fgrシグナルの変化を含むSrcファミリーキナーゼ活性の破綻は、白血球の異常な活性化や炎症性表現型と関連づけられており、Fgrは免疫恒常性および骨髄系細胞機能の研究に有用な結節点となります。がん生物学の分野でも、Fgrの発現およびシグナル伝達は、腫瘍随伴骨髄系細胞や微小環境におけるシグナル動態での役割が検討されています。

c-Fgr CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Fgrの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

c-Fgr CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Fgr 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFgr転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性c-Fgrの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFgr遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるc-Fgr依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFgr発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるc-Fgr経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。