C/EBP ζ Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419622-ACT

Cebpz codifica o fator de transcrição C/EBP zeta (C/EBPζ), um membro da família de proteínas de ligação a CCAAT/enhancer (C/EBP) que modula programas de expressão gênica envolvidos no controle do crescimento celular, na diferenciação e na transcrição responsiva ao estresse. O C/EBPζ pode atuar como um regulador dependente do contexto ao se associar a outros fatores bZIP para ajustar a atividade de promotores e enhancers, conectando sinais extracelulares a mudanças na transcrição dirigida pela RNA polimerase II. Em sistemas murinos, a atividade alterada de C/EBPζ é relevante para estudos de sinalização inflamatória, adaptação metabólica e decisões de destino celular, nos quais redes da família C/EBP se intersectam com vias de citocinas e fatores de crescimento. Essas propriedades tornam o Cebpz um nó útil para dissecar a circuitaria transcricional subjacente a mudanças fenotípicas observadas em modelos celulares relevantes para doenças, sem implicar desfechos clínicos.

C/EBP ζ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cebpz sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C/EBP ζ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cebpz em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cebpz, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C/EBP ζ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cebpz nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C/EBP ζ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C/EBP ζ em células tumorais com expressão de Cebpz silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.