Plásmido Doble Nickase (h) Brk: sc-401127-NIC

PTK6 codifica la tirosina quinasa no receptora Brk, una enzima de señalización relacionada con Src que modula el control, dependiente de la fosforilación, de la proliferación, la diferenciación y la supervivencia de las células epiteliales. Brk integra señales provenientes de receptores tirosina quinasa y de adaptadores intracelulares para influir en vías como la señalización de la familia EGFR/HER, PI3K–AKT y MAPK/ERK, con efectos posteriores sobre la dinámica del citoesqueleto y la motilidad celular. En tejidos humanos, la expresión y actividad de PTK6 se estudian con frecuencia en el contexto de la biología epitelial y la señalización oncogénica, donde se ha asociado la alteración de redes de fosforilación dependientes de Brk con cambios en la respuesta a factores de crecimiento y con fenotipos invasivos. Estas características hacen de PTK6 una diana útil para diseccionar circuitos de señalización impulsados por quinasas y la reconfiguración de rutas fosfoproteómicas en modelos relevantes para la enfermedad.

Brk El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PTK6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PTK6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PTK6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PTK6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.