BRCA2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400700-ACT

O BRCA2 humano codifica um supressor tumoral essencial para o reparo de alta fidelidade de quebras de dupla fita no DNA por recombinação homóloga, ao mediar o carregamento de RAD51 no DNA resecado e estabilizar forquilhas de replicação durante a fase S. O BRCA2 atua na rede de anemia de Fanconi/BRCA para resolver ligações cruzadas intercadeias no DNA e coordenar a sinalização de checkpoints, preservando a integridade do genoma. A disrupção ou a redução da atividade de BRCA2 aumenta a instabilidade cromossômica e eleva a suscetibilidade a malignidades, tornando-o um gene central em estudos de respostas a danos no DNA. O status de BRCA2 também influencia a sensibilidade celular ao estresse replicativo e a agentes genotóxicos, sustentando amplas aplicações em pesquisas sobre manutenção do genoma e biologia do câncer.

BRCA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BRCA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BRCA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BRCA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BRCA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BRCA2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BRCA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BRCA2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BRCA2 em células tumorais com expressão de BRCA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.