Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
BORIS Plasmide Double Nickase (m): sc-437064-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BORIS Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BORIS Double Nickase Plasmid (m) e il BORIS Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ctcfl. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BORIS Antibody (F-1): sc-377085
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BORIS Plasmide Double Nickase (m) | sc-437064-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BORIS Plasmide Double Nickase (m2) | sc-437064-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse *Ctcfl* codifica BORIS (Brother of the Regulator of Imprinted Sites), una proteina legante il DNA con dita di zinco C2H2, correlata a CTCF, che contribuisce a modellare l’architettura della cromatina e programmi trascrizionali specifici di sequenza. BORIS partecipa alla regolazione epigenetica attraverso interazioni con complessi di modifica degli istoni e di rimodellamento della cromatina, influenzando l’attività di promotori/enhancer, gli stati di metilazione del DNA e l’isolamento trascrizionale. Un’alterata espressione di BORIS è stata collegata a pattern deregolati di espressione genica osservati nella biologia delle cellule germinali e in molteplici contesti associati al cancro, rendendolo rilevante per studi sull’organizzazione della cromatina, l’identità cellulare e la stabilità del genoma. Il suo locus è quindi di interesse per indagare come cambiamenti nella regolazione 3D del genoma e nel controllo epigenetico contribuiscano a reti trascrizionali aberranti.
BORIS Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ctcfl nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ctcfl. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ctcfl. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ctcfl interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.