Bob 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400771

Panoramica

POU2AF1 (Bob 1/OBF-1) è un coattivatore trascrizionale ristretto alle cellule B che si lega a OCT1/POU2F1 e OCT2/POU2F2 per potenziare la trascrizione dei geni delle immunoglobuline e, più in generale, i programmi di espressione genica delle cellule B. Supporta le risposte del centro germinativo, la ricombinazione di class switch e la differenziazione in plasmacellule integrando l’attività degli enhancer sui motivi octamerici con input di segnalazione che modellano l’attivazione e la sopravvivenza delle cellule B. Un’espressione deregolata di POU2AF1 e i circuiti trascrizionali associati sono stati riportati in neoplasie delle cellule B, inclusi linfomi e leucemie, e in fenotipi immunitari legati ad alterazioni delle risposte umorali. Per questo, Bob 1 è comunemente studiato nei pathway che controllano l’identità delle cellule B, la maturazione guidata dall’antigene e la regolazione trascrizionale dei geni effettrici del sistema immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Bob 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POU2AF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POU2AF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POU2AF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Bob 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POU2AF1 per lo studio della segnalazione di Bob 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni POU2AF1 critici per la funzione di Bob 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POU2AF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Bob 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Bob 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POU2AF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Bob 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Bob 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POU2AF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POU2AF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.