Plásmido Doble Nickase (h) BNIP-3: sc-400985-NIC

El gen humano **BNIP3** codifica BNIP-3, una proteína atípica de tipo *BH3-only* que se localiza en las mitocondrias y regula decisiones sobre el destino celular en condiciones de hipoxia y estrés metabólico. BNIP-3 participa en el control de calidad mitocondrial al promover la mitofagia mediante interacciones con LC3 a través de su motivo LIR, y también puede influir en la permeabilidad mitocondrial y en programas de muerte celular según el contexto. Su expresión está estrechamente vinculada a la señalización de HIF-1, la homeostasis de especies reactivas de oxígeno y cambios en la fosforilación oxidativa, conectando a BNIP-3 con vías más amplias que controlan la bioenergética y la adaptación al estrés. La actividad desregulada de BNIP-3 se ha asociado con afecciones que cursan con daño hipóxico y disfunción mitocondrial, incluida la biología del cáncer, el daño relacionado con isquemia y la neurodegeneración, lo que lo convierte en un objetivo frecuente en estudios mecanísticos de respuestas al estrés.

BNIP-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BNIP3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BNIP3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BNIP3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BNIP3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.