Partículas Lentivirales de Activación (m) BMAL1: sc-419206-LAC

Arntl codifica el factor de transcripción PAS de tipo hélice‑bucle‑hélice básica BMAL1, un componente central del reloj circadiano de los mamíferos que forma heterodímeros con CLOCK/NPAS2 para impulsar la transcripción rítmica a través de elementos E‑box. BMAL1 regula la expresión oscilatoria de genes que controlan el metabolismo, la homeostasis redox, las respuestas al daño del ADN y la señalización inmunitaria, integrando la temporización celular con el estado fisiológico. La alteración de programas transcripcionales dependientes de BMAL1 se asocia con fenotipos de desalineación circadiana y con una susceptibilidad modificada en modelos de disfunción metabólica, inflamación y procesos neuroconductuales. En sistemas murinos, Arntl actúa como un nodo central para estudiar los bucles de retroalimentación transcripcional que involucran a los represores PER y CRY y las redes de genes regulados por el reloj situadas aguas abajo.

Las partículas de activación lentiviral BMAL1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Arntl en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BMAL1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Arntl, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BMAL1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Arntl y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.