Plásmido Doble Nickase (m) BLM: sc-419336-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)BLM consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BLM (m) y el plásmido de doble nickasa BLM (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Blm. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BLM Anticuerpo (B-4): sc-365753
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) BLM | sc-419336-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) BLM | sc-419336-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Blm de ratón codifica la helicasa de ADN BLM de la familia RecQ, un factor clave para el mantenimiento del genoma que resuelve estructuras secundarias aberrantes del ADN y favorece una recombinación homóloga precisa. BLM participa en el reinicio de las horquillas de replicación, la resección de los extremos y la disolución de dobles uniones de Holliday en conjunto con el complejo BTR (BLM–TOP3A–RMI1/2), limitando así los eventos de entrecruzamiento (crossovers) y los reordenamientos cromosómicos. A través de estas actividades, BLM se integra en las vías de respuesta al daño del ADN que involucran la señalización ATR/CHK1 y la red de anemia de Fanconi durante el estrés replicativo. La alteración de la función de BLM se asocia con un aumento del intercambio de cromátidas hermanas, inestabilidad genómica y fenotipos de predisposición al cáncer, lo que convierte a Blm en un locus útil para estudiar defectos de reparación del ADN y procesos mutacionales en células de mamífero.
BLM El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Blm en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Blm. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Blm. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Blm alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.